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流式检测细胞样品的制备

分类:技术支持   发布时间 2023/5/18   阅读: 420
方案A:组织培养细胞的制备。
方案B:淋巴组织细胞制备。
方案C:非淋巴组织细胞制备。
方案D:全血PBMC的分离。
 小贴士
1、流式细胞仪检测需要将细胞制备成单细胞悬液。
 2、避免细胞成团,以免堵塞流式细胞仪。
 3、实体组织制备单细胞悬液需要物理方法分离或酶消化法进行,具体组织的方法,依照经验来进行。
                                                                        方案A: 组织培养细胞的制备
实验材料: Accutase™ 酶细胞分离培养基 (eBioscience Cat. No. 00-4555)
 eBioscience® 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222) 15ml或50ml的离心管。
 实验流程:
 1、如果是悬浮细胞,则小心将细胞移入离心管中,进行计数和活力分析。进行步骤3.
2、如果是贴壁细胞,建议使用Accutase™ 酶细胞分离培养基 (eBioscience Cat. No. 00-4555)是细胞团块分离,制备成单细胞悬液后置于离心管中计数和活力分析。(注意:accutase 可能会改变某些细胞表位,应该预实验观察避免其干扰检测)
 3、300g 离心5min。弃去上清,应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度为2×107/ml。
                                                                              方案B:淋巴组织细胞制备。
实验材料:
 60×15mm 的组织培养皿
5ml 注射器
细胞过滤器(尼龙网过滤)
 eBioscience® 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的离心管。
 实验方案:
 1、获取组织(脾脏,淋巴结或胸腺)加入5~10ml eBioscience® 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222),使用5ml注射器注射心研磨组织(或采用两片载玻片研磨亦可)。
2、收集磨碎的细胞悬液,过滤至离心管中计数和活力分析。
 3、300g 离心5min。弃去上清,应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度为2×107/ml。
                                                                  方案C:非淋巴组织细胞制备。
剪刀和手术刀片
PBS
 60×15mm 的组织培养皿
 5ml 注射器
 细胞过滤器(尼龙网过滤)
 eBioscience® 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的离心管。
 实验流程:
1、获取组织剪碎或切碎组织为2~4mm碎块,用PBS稀释适量的酶进行消化(温度,方法依照酶的说明书)。
 2、小心分离细胞团块,过滤除去死细胞和碎片。
3、300g 离心5min,弃去上清。加PBS 5ml 300g 离心5min,弃去上清,重复一次。计数和活力分析。
 4、300g 离心5min,弃去上清,应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度为2×107/ml。
                                                                      方案D:全血PBMC的分离。
 实验材料:
 PBS Ficoll® 淋巴细胞分离液
eBioscience® 流式染色缓冲液 (eBioscience Cat. No. 00-4222)
15ml或50ml的离心管。
实验流程:
1、以PBS 1:1稀释血样。将血样轻轻加到2ml Ficoll® 淋巴细胞分离液或其他品牌亦可。
 2、1000g离心20min,小心吸取分离液和PBS之间的雾状细胞,即为PBMC。至新的离心管中。
3、4度,300g 离心5min,弃上清。应用适量的流式染色缓冲液重悬细胞,计数和细胞活力,调整细胞浓度为2×107/ml。
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