产品描述：

攸碧艾最新研发合成的体内转染纳米试剂-NanoTrans (In Vivo)为新一代非病毒非脂质体高效转染试剂，可用于动物体内实验，如RNA干扰或蛋白过表达实验。本产品利用细胞对特定尺寸纳米粒的胞吞原理，经过液相超声分散、超速离心等多级工艺制备合成不同粒径的纳米粒子转染试剂，可以在动物体内实现高效转染。该纳米粒子呈球形，经修饰后带正电荷，能与各种带负电荷的核酸（DNA、siRNA等）结合，形成纳米粒子-核酸转染复合物。纳米级别的转染复合物能被细胞高效识别，并通过胞吞进入细胞，纳米粒子上的正电荷由于质子海绵效应，将负载的核酸从溶酶体中释放出来发挥作用。本产品采用的纳米非脂质材料利用仿生原理，能有效降低对动物细胞和组织的毒性，同时保护核酸不被动物体内的核酸酶降解，能耐受体内复杂环境，不会诱发机体产生免疫反应。

本产品解决了病毒载体的病毒毒性、免疫原性、DNA装载量有限、耗时长等多个问题，并具有高转染效率、低细胞毒性、操作简单快捷、性价比高等优点。转染时只需将转染试剂与核酸按比例混匀后室温孵育15-20分钟即可注射到活体动物组织内。本产品可以转染体内多种组织，包括肌肉组织、神经组织、皮肤、心、肾、肝、肺、血液等，且可以同时可以转染多种小片段RNA、多种质粒DNA及其共转染。RNA可在体内持续作用1-2周，DNA可在体内持续作用2-4周。

产品特点：

1、可转染动物体内多种组织，如肌肉、神经组织、皮肤、心、肾、肝、肺、血液等。

2、转染操作过程简便，NanoTrans和核酸按比例混匀孵育15-20分钟即可直接对活体组织进行注射。

3、具有生物相容性，生物可降解，细胞毒性低，不会诱发机体免疫反应。

4、适合于小RNA、DNA转染及其共转染，可同时共转染多种小RNA、多种质粒或小RNA和质粒。

5、无需病毒包装，最快2-3天即可获得结果，大幅提高实验效率和性价比。

使用说明：

不同的组织用量不同，以下操作以小鼠尾静脉注射为例。

1、准备质粒及小RNA

对于质粒，需要使用无内毒素质粒大提试剂盒抽提或纯化，确保获得内毒素含量低的高质量质粒DNA，质粒浓度200ng/ul以上。质粒载体上可以携带荧光基因（如GFP等），方便观察转染效率。

对于小RNA制备，一般由专业的生物技术服务公司合成，加入RNase Free Water稀释至浓度为20μM即可进行转染。小RNA上可以修饰荧光基团（如Cy5.5等），方便观察转染效率。

2、制备转染复合物：取一无菌无酶离心管加入50μl NanoTrans (In Vivo)，再加入50μg RNA或质粒DNA，充分混匀（吹打混匀或涡旋混匀），室温静置15-20min即完成转染复合物的制备。

3、使用微量注射器吸取转染复合物，并进行小鼠尾静脉注射。（组织注射时注意在多个注射点位注射使转染复合物在组织中分布均匀。）

4、注射后6-12h观察动物状态。如果需要进行活体成像，需要注射荧光素酶质粒。小RNA注射24-48h后可检测mRNA表达水平，48h后检测蛋白表达水平。质粒DNA注射72h后可进行检测基因表达。

注意事项：

1、整个转染实验过程中要注意无菌操作，避免污染影响实验。

2、核酸质量影响转染效果，请使用高纯度高质量无内毒素核酸，建议使用无内毒素质粒大提试剂盒抽提或纯化。核酸使用纯水稀释，OD260/280为1.8-2.0，浓度以200ng/μl以上，1000ng/μl左右为佳。核酸浓度过高容易出现浑浊，核酸浓度过低影响转染效果。核酸溶液轻微浑浊不影响使用。

3、采用本品进行转染时，质粒DNA用质量(μg)进行计量。请在转染前检测质粒DNA纯度和浓度，并根据质粒浓度和所需转染质量计算出转染质粒体积。

4、转染复合物在室温制备，制备前请先将核酸、NanoTrans (In Vivo)等试剂恢复至室温，现配现用。

5、由于不同实验动物和注射部位情况不同，建议先在表1推荐用量的基础上设置梯度用量以确定最佳用量。部分动物组织可根据组织的长、宽和重量适当调整试剂用量，如小鼠皮下注射肿瘤，肿瘤长0.6cm，宽0.3cm，用量约为30μl NanoTrans (In Vivo)和30μg质粒，表1为部分推荐用量。

6、如果转染效果不佳，可以在保证实验动物状态良好的情况下适当加大转染复合物的用量来提高转染效率。

7、一般RNA可在体内持续作用1-2周，DNA可表达2-4周，如果需要长期维持转染效果，可以多次注射的方法。

8、本产品仅作体外科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

9、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

保存方法：

4℃保存，2年有效，切勿冻存。冰袋或者湿冰运输，短时间内可室温运输，但需避免光源热源。

使用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。