产品描述：

RIPA裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液，对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、IP及ELISA等实验。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液（中）的主要成分为50mM Tris-Hcl (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% Sodium Deoxycholate，0.1% SDS以及Sodium Orthovanadate，Sodium Fluoride，EDTA等。

本产品需要和常规的蛋白酶抑制剂一起使用，以达到更好的提取效果。本产品含有磷酸酶抑制剂，可用于提取磷酸化蛋白。使用本产品裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度；由于本产品含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法检测使用本产品裂解得到的蛋白样品的蛋白浓度。

使用说明：

1、充分溶解混匀裂解液，在使用前数分钟取适量裂解液并加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。

2、根据样品的类型进行以下操作：

对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数次，使裂解液 和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 s后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，去除培养基，用手指轻弹管底以分散细胞，按照6孔板每孔细胞加入 150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。（如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞比较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。）

对于组织样品：把组织剪切成小碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

3、样品充分裂解后，4℃ 10,000-14,000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western Blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项：

1、4℃保存时，裂解液中的SDS易析出，使用前请置于37℃使其完全溶解，待恢复至室温即可使用。

2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3、关于裂解液用量，通常6孔板每孔细胞加150ul裂解液足够。如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量至200或250ul。

4、RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现透明胶状物，其主要成分为基因组DNA。当检测的目标蛋白不与基因组DNA紧密结合，可以直接离心裂解产物，取上清液用于后续实验；如果目的蛋白与基因组DNA结合非常紧密，可通过超声处理打碎打散透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等，通常不必进行超声处理即可检测。

5、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

6、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

保存方法：

-20℃保存，一年有效。

适用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。

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