产品描述：

攸碧艾最新研发合成的细胞转染纳米试剂-NanoTrans (In Vitro)为新一代非脂质体高效转染试剂，利用细胞对特定尺寸纳米粒的胞吞原理，经过液相超声分散、超速离心等多级工艺制备合成不同粒径的纳米粒子转染试剂，可以实现高效转染。该纳米粒子呈球形，经修饰后带正电荷，能与各种带负电荷的核酸（DNA、siRNA等）结合，形成纳米粒子-核酸转染复合物。纳米级别的转染复合物能被细胞高效识别，并通过胞吞进入细胞，纳米粒子上的正电荷由于质子海绵效应，将负载的核酸从溶酶体中释放出来发挥作用。本产品采用的纳米非脂质材料利用仿生原理，能有效降低对细胞的毒性，同时保护核酸不被酶降解，因而提高了转染效率。

本产品使用简单方便，试剂与核酸按比例混匀后室温孵育15-20分钟即可进行转染，不需要使用其他试剂稀释核酸和转染试剂后再混合孵育，转染后一般也无需换液。本产品兼容无血清和含血清培养体系，经多次实验验证血清和抗生素的存在不会对转染产生负面影响，反而有助于提高转染效率。

本产品普适性强，对于难转染的细胞系、原代细胞等均具有较好的转染效率，如RAW264.7、小鼠胚胎干细胞，间充质干细胞，BMDM等细胞。本产品可以转染DNA、siRNA、shRNA、miRNA、mRNA，及其共转染。如果需要转染小分子药物，可联系攸碧艾，咨询订购后使用。相较于目前常用的脂质体转染试剂、电转染、慢病毒转染等转染方法，本产品具有更高的转染效率和更低的细胞毒性，适用的细胞和核酸类型更多，实验操作更简便，性价比更高。

产品特点：

1、对于难转染的细胞系、原代细胞、干细胞等均具有较好的转染效率。

2、转染操作过程简便，NanoTrans和核酸按比例混匀并孵育15-20分钟即可转染，且一般无需换液。

3、具有生物相容性，生物可降解，细胞毒性低，降低脆弱细胞特别是原代细胞转染时的细胞死亡率。

4、本产品的转染体系可兼容血清和抗生素，含血清的完全培养基有助于提高转染效率。

5、适合于小RNA、DNA转染及其共转染，可同时共转染多种小RNA、多种质粒或小RNA和质粒。

使用说明：

不同的细胞培养容器转染用量不同，以下操作以24孔板转染为例。

1、准备质粒及小RNA

对于质粒，需要使用无内毒素质粒大提试剂盒抽提或纯化，确保获得内毒素含量低的高质量质粒DNA，质粒浓度200ng/ul以上。质粒载体上可以携带荧光基因（如GFP等），方便观察转染效率。

对于小RNA制备，一般由专业的生物技术服务公司合成，加入RNase Free Water稀释至浓度为20μM即可进行转染。小RNA上可以修饰荧光基团（如Cy5.5等），方便观察转染效率。

2、细胞培养

对于贴壁细胞，提前将对数生长期细胞接种在24孔板中，过夜培养至细胞贴壁且细胞汇合度在70%-80%时进行转染。

对于悬浮细胞，采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的2/3时进行转染。

3、更换培养基：在转染前30min，给待转染的细胞更换新鲜培养基（可以使用含血清的完全培养基），每孔500μl培养基。

4、制备转染复合物：取一无菌无酶离心管加入2.5μl NanoTrans (In Vitro)，再加入2.5μl RNA（20μM母液）或/和2.5μg质粒，充分混匀（吹打混匀或涡旋混匀），室温静置15-20min即完成转染复合物的制备。

5、将制备好的转染复合物滴加到24孔板中，轻柔混匀，将24孔板放回细胞培养箱中继续培养。

6、转染后6-12h观察细胞状态，如细胞状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96h得到结果。对于转染带荧光的小片段RNA, 转染6h后即可应用流式细胞仪、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测转染效率。建议转染24-48h后检测mRNA表达水平，转染48h后检测蛋白表达水平。

注意事项：

1、转染过程中可以采用含血清的完全培养基培养，且有助于提高转染效率。

2、整个转染实验过程中要注意无菌操作，避免细胞被污染。

3、核酸质量影响转染效果，请使用高纯度高质量无内毒素核酸，建议使用无内毒素质粒大提试剂盒抽提或纯化。核酸使用纯水稀释，OD260/280为1.8-2.0，浓度以200ng/μl以上，1000ng/μl左右为佳。核酸浓度过高容易出现浑浊，核酸浓度过低影响转染效果。核酸溶液轻微浑浊不影响使用。

4、转染复合物在室温制备，制备前请先将核酸、NanoTrans (In Vitro)等试剂恢复至室温，现配现用。

5、转染带有荧光的小片段RNA时，注意全程避光操作。且不宜长时间观察带有荧光的小RNA的转染效率，以免荧光淬灭。小RNA携带的荧光较弱，转染后分布于整个细胞中，用荧光显微镜观察荧光较弱，不利于检测，建议用流式细胞仪检测其转染效率。

6、在保证细胞状态良好的情况下可以适当加大转染复合物的用量来提高转染效率。由于不同细胞类型的转染情况不同，建议在做批量实验前先进行预实验，在表1推荐用量的基础上设置梯度用量以确定最佳用量。

7、采用本品进行转染时，质粒DNA用质量(μg)进行计量。请在转染前检测质粒DNA纯度和浓度，并根据质粒浓度和所需转染质量计算出转染质粒体积。

8、本产品仅作体外科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

9、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

保存方法：

4℃保存，2年有效，切勿冻存。冰袋或者湿冰运输，短时间内可室温运输，但需避免光源热源。

使用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。