产品描述：

外泌体(Exosomes)是一种直径为30-200nm的微小囊泡，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。目前外泌体提取主要有超速离心、试剂盒提取等方法。其中通过超速离心法分离得到的外泌体纯度高，可满足于后续不同实验的需求，但是仪器要求高，周期长，工作量大。

本试剂盒可以快速从尿液中获得大量完整的外泌体颗粒，实验室普通离心机就可以完成，提取的外泌体适用于下游的细胞共培养、电镜、分析、Western Blot、qPCR和高通量测序等应用。

使用说明：

一、尿液样本收集和预处理：

1、收集新鲜的尿液样品，快速加入尿液预处理试剂（尿液体积 : 尿液预处理试剂=10:1），快速旋涡混匀。4℃短期存储（不超过72h）或者-80℃存储（不超过2个月）。

2、新鲜的预处理后的尿液样品，置于冰上待用；若为冻存样品，可25℃水浴解冻，待完全融化后置于冰上待用（单次提取时的尿液量建议不低于20ml）。

3、样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10min，弃沉淀，转移上清液至新的离心管中。

二、外泌体分离：

1、使用前先将外泌体抽提试剂充分混匀。

2、向上清液中加入1/4倍尿液体积的外泌体抽提试剂，涡旋振荡1min充分混匀后，4℃静置中2-3h（静置时间越久提取效率越高，但不能超过24h）。

3、离心：取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60min，弃上清，收集富含外泌体的沉淀。

4、再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃，10,000×g离心2min，弃上清，请尽可能吸尽上清液。

5、重悬：取适量的1×PBS吹打重悬沉淀，并转移至新的1.5ml离心管中。

6、收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5ml离心管于4℃，12,000×g离心2min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（若沉淀较多，重复离心操作多次至无明显沉淀，每次离心后取上清液）。

7、纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入纯化柱的上室中，于4℃以3,000×g离心10min，离心

后收集纯化柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒（注：纯化柱不可重复使用）。

8、纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃长期保存，建议外泌体分装后保存，避免反复冻融。

注意事项：

1、本产品只针对尿液来源的外泌体分离，不适用其他来源的外泌体抽提。

2、本产品仅作体外科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

3、实验员请穿实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

保存方法：

尿液预处理试剂-20℃保存，外泌体抽提试剂和纯化柱常温保存，一年有效。

使用范围：

仅限科研使用，不能应用于临床。