细胞分选(cell sorting)是根据细胞所具有的特性将某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术。常用的细胞分选的方法有两种:流式细胞分选(FACS)和免疫磁性细胞分选(MACS)。
流式细胞分选是在流式细胞术检测细胞表型的基础上,使用充电分选技术以实现多种特定表型细胞的分离。具有分选参数多、群体多、纯度高、灵活性强等优势。分选后细胞可做进一步分子生物学研究如荧光定量PCR、WB、细胞培养等。
免疫磁珠细胞分选是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性抗体结合的特性,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,而无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性抗体结合不具磁性,从而不在磁场中停留达到细胞分离的目的。磁珠细胞分选所需设备简单,对技术人员要求不高,分选所得细胞灵敏度高、纯度好且细胞活性和复苏率较好,对于下游应用影响较小,应用前景较广。
对于流式细胞分选与免疫磁性细胞分选,不同的分选方式各有优势不能互相取代。流式分选可进行多参数分选以及不同荧光强度的分选,但对设备要求较高,对细胞刺激较大但分选灵活可以达到多方面的分选要求;磁珠分选操作简单,分选速度快,细胞活性好,对设备和技术员的要求较低,但只能通过一种标记进行分选。
如果磁珠分选能达到研究要求,一般首选磁珠分选,若磁珠分选达不到要求则再考虑用流式进行分选。
当有以下几种实验要求时,细胞分选只能采用流式细胞分选而不能采用免疫磁珠细胞分选:当需要非常高纯度(95%-100%)的目标群体时;用于分离其表面上具有低密度受体的群体;根据表面受体密度浓缩表达量不同的群体;基于多色染色分选细胞;基于内部染色(例如DNA或胞内抗原)分选细胞。
1、单细胞悬液制备。
2、磁珠或荧光标记。
3、细胞分选。
1、客户提供新鲜组织或细胞或血液样本。新鲜组织离体后制成单细胞悬液,加入PBS/培养基内4℃运输;悬浮细胞直接收集于离心管中,常温或4℃运输;贴壁细胞建议胰酶消化后重悬离心后弃上清,将细胞沉淀置于冰上4℃运输;细胞样本也可置于培养瓶中常温运输;血液样本采集在EDTA/肝素钠的采血管内,按1:8(保护液:血液)的比例加入,混匀后4℃运输。
2、公司提供单细胞悬液制备、磁珠分选、流式分选、流式分析、细胞代养等服务。
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