一、实验简介

骨组织由黏多糖和蛋白纤维构成的有机质及沉积于其中的无机盐组成，无机盐主要是羟基磷灰石结晶，其中大部分为磷酸钙和碳酸钙。由于骨的特殊构成，使其质地较硬，较难直接制片，因此必须对其进行脱钙处理。用化学或物理方法，从有机胶原基质、钙化软骨和周围组织中去除无机钙的过程称为脱钙。常用的脱钙方法分为快速脱钙法和慢速脱钙法。

快速脱钙法主要利用酸性试剂（如硝酸）快速溶解骨组织或钙化组织中的钙盐，速度快，但可能对组织结构和生物大分子（如蛋白质、核酸）造成一定损伤。

慢速脱钙法主要使用乙二胺四乙酸（EDTA）作为脱钙剂，EDTA是一种金属离子螯合剂，能温和地整合钙离子，最大程度地保存组织的形态结构和生物分子的完整性，但脱钙速度非常慢。

二、实验流程

1、取材骨组织或钙化组织，厚度不宜超过5mm。通常先进行固定（如用4%多聚甲醛固定24小时）然后用PBS和蒸馏水清洗。

2、脱钙：

（1）快脱：将组织放入硝酸脱钙液中，脱钙液体积应为组织体积的15-20倍。为加快脱钙速度，可将其置于37℃中或采用微波辅助法（200W加热5min，重复3-5次，中间间隔3-5min）。脱钙时间通常为24-36h，具体时间需根据组织大小和密度调整。每天更换新脱钙液直至脱钙完成。

（2）慢脱：将组织浸入EDTA脱钙液中，脱钙液体积应为组织体积的20-30倍。脱钙过程通常在室温下进行，需数周至数月。为加快速度，可置于37℃中并定期（4-5天）更换一次新脱钙液。

3、用细针轻刺组织，若无阻力感、组织变软且能轻易弯折，即为终点。脱钙完成后，用蒸馏水彻底冲洗组织。随后进行可常规脱水、包埋和切片。

三、注意事项

1、骨组织取材尽量去除皮肤和肌肉，厚度不宜超过5mm，以便脱钙液与骨组织充分接触，加快脱钙。

2、样本放置于10-15倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样

3、固定液可多不可少；常温（25℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻；切勿固定时间过长。

4、若需要进行免疫组化、原位杂交、分子生物学研究（如检测特定抗原、核酸），推荐使用EDTA慢脱法，可最大程度保护样本完整性。

5、若用于常规病理诊断、HE染色，且时间紧迫，可选用快脱法。

四、联系咨询

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