一、实验简介

新鲜组织经过取材、固定、脱水、透明、浸蜡后，用特定的包埋模具将前期处理的组织块与融化的石蜡一起包埋成组织蜡块的过程称为组织取材包埋。石蜡包埋不仅是经典的病理实验方法，也是当前临床病理组织的常规储存方式，能够长期保存并维持原始的细胞形态和组织结构。

包埋的关键一是切面平整，二是方位正确。要求在包埋时，应采用镊子轻压组织块拱起部分，使之平贴于底部，通常采用组织的大面包埋，囊壁、管腔组织应竖直包埋。特殊组织按特殊要求进行包埋。

二、实验流程

1、取材：使用锋利的刀或剪切取组织，组织块的厚度约为0.2-0.3cm，大小为1.5cm×1.5cm×0.3cm为宜。

2、固定：取好的组织块用其10-20倍体积的固定液固定24-48h，固定液常用4%多聚甲醛或者10%缓冲中性福尔马林（甲醛）液。

固定后的组织块应置水龙头下以自来水流水冲洗，大块组织一般冲洗24h，小块组织一般冲洗2-10h。固定液为多聚甲醛时，用于免疫组织化学等特殊染色的组织应将组织浸入磷酸盐缓冲液中，每1h更换一次，重复6次。冲洗好的组织可存放在75%酒精中。

3、脱水：通过一系列浓度梯度递增的酒精逐步将组织中的水分置换出来。从30％乙醇开始，经过50％、70％、80％、95％、100％至完全脱水。一般各级乙醇中放置45min-1h。过度脱水会导致组织变脆。脱水必须在有盖的瓶中进行，以防止高浓度乙醇吸收空气中水分导致浓度降低而使脱水不彻底。

4、透明：脱水后，组织中的酒精需要被一种既能与酒精互溶又能溶解石蜡的有机溶剂（即透明剂，如二甲苯）置换出来。此步骤后，组织会呈现透明或半透明状态，故得名“透明”。

通常使用二甲苯透明，透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在30min-2h，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过3h为宜。时间过短透明不充分，影响浸蜡；时间过长则组织易收缩变脆变硬。可将组织块先经纯乙醇与二甲苯的等体积混合液，再进入纯二甲苯。

材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱水彻底，组织为透明状态，若组织出现白色云雾状，说明脱水不净，需要返工处理，但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分，并保持其无水状态。

5、浸蜡：用石蜡彻底取代组织中的透明剂，并为组织提供足够的支撑硬度以便切片。须在恒温箱中进行，温度调节至高于石蜡熔点3度，使经过透明的组织块依次用石蜡与二甲苯的等量混合液、纯石蜡处理。纯石蜡应处理2-3次，时间依材料性质而定，一般每次需15-30min。如果来不及包埋，可以将已经完成浸蜡的组织块取出放在恒温箱外，第二天继续。

6、包埋：使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。先准备好包埋盒，将熔蜡（56-58℃或60-62℃硬蜡）倒入盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在包埋盒底部，切面朝下，再把包埋盒平放在冷水中，待表面石蜡凝固后立即将包埋盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出。包埋用蜡的温度应略高于透蜡温度，保证组织块与周围石蜡完全融为一体。石蜡的迅速冷却也很重要，否则包埋块中将会产生结晶。以后切片时引起碎裂。待蜡块完全凝固以后，便可取出蜡块，置于常温干燥的环境中保存。

三、样本收集与运输

1、客户提供已固定但未包埋的组织样本。组织离体后，选择合适的固定液和容器立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，固定时间建议24-48h，大标本固定12h，再切开固定。标本常温（25℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰。

2、固定样本常温运输送样。运输过程中务必做好标识，避免样本混淆。

四、联系咨询

攸碧艾欢迎您来电咨询实验服务，联系电话：400-681-8582。