ELISA实验样本收集与处理方法（YOBIBIO ELISA代测说明）

ELISA检测被广泛应用于各种抗原和抗体测定。目的是为实验提供准确可靠的定量分析的实验依据。在ELISA检测中影响因素较多,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。为了保证实验数据的可靠性，在实验过程中必须坚持全面和全程的质量控制。在收集样本前需有一个完整的方案。

本篇为攸碧艾结合文献、科研成功经验及试剂盒说明书整理的ELISA样本收集与处理方法，供广大科研工作者参考使用。委托本公司进行ELISA实验代测业务的，需依照本方法对样本进行收集和处理。

一、样本类型

1、液体类样本：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

2、细胞沉淀、组织等。

二、样本保存

对收集后当天或次日进行检测的样本，储存在4℃备用。超过时间的需低温保存。-20℃或-70℃保存：对于保存期限超过1天的样本，在-20℃或-70℃条件下保存。如有特殊原因需要周期收集样本，将样本及时分装后放在-20℃或 -70℃条件下保存。避免反复冻融。一般情况下，样本2-8℃可保存48h，-20℃下可保存1个月。-70℃下可保存6个月。

三、样本收集和处理

1、血清：室温血液自然凝固10-20min后，离心20min左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。-20℃或者-80℃冷冻保存。

2、血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，抗凝血离心20min左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20℃或者-80℃冷冻保存。

3、尿液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液：用无菌管收集。离心20min左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20℃或者-80℃冷冻保存。

4、细胞培养上清：用于检测分泌性成分，用无菌管收集。离心20min左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。

5、细胞沉淀：用于检测细胞内的成分，用PBS稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20min左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。-20℃或者-80℃冷冻保存。如代测时需本公司进行细胞沉淀样本的处理，可将细胞沉淀样本装入1.5ml离心管邮寄至本公司（数量需至少肉眼可见），本公司在ELISA正式实验前按上述方法处理样本，收取20元/样本的样本处理费。

温馨提示：为确保您得到准确的细胞内成分数据，如样本类型为细胞沉淀，建议您在完成上清收集后，进行BCA蛋白定量检测并记录，结合蛋白定量检测结果和ELISA检测结果，计算出细胞内成分数据。如需本公司在ELISA检测前进行BCA蛋白定量检测，本公司按每80个样本300元（不足80部分按80个计算）的标准收取费用。

6、组织样本：切割样本后，称取重量。加入一定量的PBS，用手工或匀浆器将标 本匀浆充分。离心20min左右（2000-3000转/分）。仔细收集匀浆上清。-20℃或者-80℃冷冻保存。如代测时需本公司进行组织样本的处理，可将组织样本邮寄至本公司（至少黄豆粒大小），本公司在ELISA正式实验前按上述方法处理样本，收取20元/样本的样本处理费。

温馨提示：为确保您得到准确的组织内成分数据，如样本类型为组织，建议您在完成上清收集后，进行BCA蛋白定量检测并记录，结合蛋白定量检测结果和ELISA检测结果，计算出组织内成分数据。如需本公司在ELISA检测前进行BCA蛋白定量检测，本公司按每80个样本300元（不足80部分按80个计算）的标准收取费用。

四、注意事项

1、攸碧艾ELISA试剂盒单孔所需样本量为约60ul，因此每个样本量收集体积＝约60ul×检测指标。如要做复孔，样本量收集体积＝约60ul×检测指标×2 ，更多复孔以此类推。

2、收集样本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。以确定样本保存温度。保存条件参考样本保存。

3、血清样本采集时，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血样本可能会增加非特异性显色。

4、为了保证尿液检测结果的准确性，必须正确收集尿液样本和保存。盛尿容器要清洁干燥。最好使用一次性的容器（如塑料尿杯），避免因用药并清洗不干净而造成的污染，影响检测结果。尿液样本必须新鲜，留取后，应及时检测或保存，以免细菌繁殖。因在室温（尤其是夏季）中久置后尿中的磷酸盐等可析出结晶而干扰检测。

5、冻结样本融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分轻缓混匀，避免气泡，可上下颠 倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。

6、混浊或有沉淀的样本应先离心或过滤，澄清后再检测。

7、反复冻融会使蛋白效价降低，所以待测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。也可加入适当防腐剂。

8、激素类样本需添加抑肽酶。全血样本提取好了应该及时离心血清或者血浆。并要求-70℃条件下保存，如果一个月左右可以开展实验可以-20℃保存，期间不能反复冻融。

9、冻存后的全血不可以再提取血清、血浆样本进行ELISA实验。具体原因如下：

（1）全血冻存后解冻，用常规离心方式提取血清仍然是可以的，唯一不利的一点是，伴随冻融的过程，会出现比较严重的溶血事件。而最后提取出来的血清能否做ELISA，主要取决于溶血程度、所检测目标蛋白的性质及实验的最终目的。

（2）溶血释放的胞内组分往往容易影响本底，甚至出现假阳性；而蛋白酶的释放可能导致目标蛋白的降解影响最终结果；目标蛋白的大小、稳定性、特异性（相对抗体而言）又影响其自身与酶标板的吸附、与抗体的结合率及自身降解等。以上各种不确定性因素存在下，如果只是对血清中某种血清蛋白做定性检测，可以得出相应结果；若是定量分析，从可靠性的角度出发，不建议使用。

五、代测说明

1、活动期间，凡购买攸碧艾任意ELISA试剂盒，均提供对应指标的免费代测一次。

2、单个指标，96T试剂盒最多检测88个样本，48T试剂盒最多检测40个样本（8个是标准品孔），请据此计算使用试剂盒的数量。

3、请务必仔细填写“样本收集表”。其中样本编号栏的编号必须与样本实物上的编号一致。

4、样本运输：将样本及时分装后干冰运输，确保放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。运输时应添加足够量的干冰以覆盖样本，并考虑运输过程中的干冰损耗，应确保样本到达本公司时仍有充足的干冰用以维持样本温度。干冰损耗可按1天损耗3kg计算。

5、收到样本核对无误后，3个工作日完成检测并反馈结果，实验数据以文件格式回复。

6、代测结束后，已开封试剂盒有效期为1个月，有效期内本公司可代为保管未使用完的试剂盒，过期做报废处理；也可在代测结束后将剩余试剂盒和样本寄回客户，质保期为自开封日起1个月。

7、购买试剂盒赠送免费代测一次/盒，后续如客户仍需使用剩余样本孔进行代测，需收取300元/次代测费。