ELISA实验样本收集与处理方法 （YOBIBIO ELISA代测说明）
 Elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。目的是为实验提供准确可靠的定量分析的实验依据。在Elisa测定中影响因素较多,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果.为了保证实验数据的可靠性， 在实验过程中必须坚持全面和全程的质量控制。在收集标本前需有一个完整的方案。
 本篇为攸碧艾（YOBIBIO)结合文献、科研成功经验及试剂盒说明书，整理的样本收集与处理方法，供广大科研工作者参考使用。
 委托我公司进行ELISA实验代测业务的，需依照本方法对样本进行收集和处理。
 一、样本类型
 1. 液体类标本：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
 2. 细胞沉淀、组织等
 二、样本保存 4℃保存：
对收集后当天或次日进行检测的样本，储存在 4 ℃ 备用。超过时间的需低温保存。 -20 ℃ 或 -70 ℃保存：对于保存期限超过1天的样本，在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。如有特殊原因需要周期收集样本， 将样本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。 一般情况下，标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时， -20 ℃下 可保存 1 个月。 -70 ℃下可保存 6 个月。
 三、 样本收集和处理
 ➢血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/ 分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 ➢血浆：应根据试剂盒的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，抗凝血 离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
 ➢尿液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液：用无菌管收集。离心 20 分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
➢细胞培养上清：用于检测分泌性的成分，用无菌管收集。离心 20 分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
➢细胞沉淀：用于检测细胞内的成分，用 PBS 稀释细胞 悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细 胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或 者-80°C 冷冻保存。
 如代测时需我公司进行细胞沉淀样本的处理，可将细胞沉淀样本装入1.5ml离心管邮寄至我公司（数量需至少肉眼可见），我公司在ELISA正式实验前按上述方法处理样本，收取20元/样本的样本处理费。
温馨提示：为确保您得到准确的细胞内成分数据，如样本类型为细胞沉淀，建议您在完成上清收集后，进行BCA蛋白定量检测并记录，结合蛋白定量检测结果和ELISA检测结果，计算出细胞内成分数据。如需我公司在ELISA检测前进行BCA蛋白定量检测，我公司按每80个样本200元（不足80部分按80个计算）的标准收取费用。
➢组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，用手工或匀浆器将标 本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集匀浆上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 如代测时需我公司进行组织样本的处理，可将组织标本邮寄至我公司（至少黄豆粒大小），我公司在ELISA正式实验前按上述方法处理样本，收取12元/样本的样本处理费。
 温馨提示：为确保您得到准确的组织内成分数据，如样本类型为组织，建议您在完成上清收集后，进行BCA蛋白定量检测并记录，结合蛋白定量检测结果和ELISA检测结果，计算出组织内成分数据。如需我公司在ELISA检测前进行BCA蛋白定量检测，我公司按每80个样本200元（不足80部分按80个计算）的标准收取费用。
 四、注意事项
 1. 攸碧艾ELISA试剂盒单孔所需样本量为约60ul，因此每个标本量收集体积＝约60ul ×检测指标。如要做复孔，标本量收集体积＝约60ul ×检测 指标×2 ，更多复孔以此类推。
 2. 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。以确定样本保存温度。保存条件参考样本保存。
 3. 血清标本采集时，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质， 以 HRP 为标记的 ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
4. 为了保证尿液检测结果的准确性，必须正确收集尿液标本和保存。盛尿容器要清洁干燥。 最好使用一次性的容器（如塑料尿杯），避免因用药并清洗不干净而造成的污染，影响 检测结果。尿液标本必须新鲜，留取后，应及时检测或保存，以免细菌繁殖。因在室温 （尤其是夏季）中久置后尿中的磷酸盐等可析出结晶而干扰检测。
 5. 冻结标本融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分轻缓混匀，避免气泡，可上下颠 倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。
 6. 混浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
 7. 反复冻融会使蛋白效价降低，所以待测标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。也 可加入适当防腐剂。
 8. 激素类标本需添加抑肽酶。 全血样本提取好了应该及时离心血清或者血浆。并要求-70℃条件下保存，如果一个月左右可以开展实验可以-20℃保存，期间不能反复冻融。
冻存后的全血不可以再提取血清、血浆样本进行elisa实验的具体原因如下：
1、全血冻存后解冻，用常规离心方式提取血清仍然是可以的，唯一不利的一点是，伴随冻融的过程，会出现比较严重的溶血事件。而最后提取出来的血清能否做elisa，主要取决于溶血程度、所检测目标蛋白的性质及实验的最终目的。
 2、溶血释放的胞内组分往往容易影响本底，甚至出现假阳性；而蛋白酶的释放可能导致目标蛋白的降解影响最终结果；目标蛋白的大小、稳定性、特异性（相对抗体而言）又影响其自身与酶标板的吸附、与抗体的结合率及自身降解等。以上各种不确定性因素存在下，如果只是对血清中某种血清蛋白做定性检测，可以得出相应结果；若是定量分析，从可靠性的角度出发，不建议使用。
五、代测说明
 1.活动期间，凡购买攸碧艾任意ELISA试剂盒，均提供对应指标的免费代测一次。
 2.单个指标，96T试剂盒最多检测88个样本，48T试剂盒最多检测40个样本（8个是标准品孔），请据此计算使用试剂盒的数量。
 3.请务必仔细填写“样本收集表”。其中，样本编号栏的编号必须与样本实物上的编号一致。
 4.样本运输：将样本及时分装后干冰运输，确保放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。运输时应添加足够量的干冰以覆盖样本，并考虑运输过程中的干冰损耗，应确保样本到达我公司时仍有充足的干冰用以维持样本温度。干冰损耗可按1天损耗3kg计算。
 5.收到样本核对无误后，2个工作日完成检测并反馈结果，实验数据以文件格式回复。
 6.代测结束后，已开封试剂盒有效期为1个月，有效期内我公司可代为保管未使用完的试剂盒，过期做报废处理；也可在代测结束后将剩余试剂盒和样本寄回客户，质保期为自开封日起1个月。
 7.购买试剂盒赠送免费代测一次/盒，后续如客户仍需使用剩余样本孔进行代测，需收取300元/次代测费。