一、实验简介

血管生成（Angiogenesis）是从已有毛细血管或微静脉形成新血管的过程，受促血管因子（如VEGF、bFGF）与抑制因子（如内皮抑素）的动态平衡调控。失衡会导致病理状态，一种是过量血管生成，比如肿瘤转移、糖尿病视网膜病变；另一种是血管生成不足，比如心肌梗死、慢性伤口。

内皮细胞保留了分裂和快速迁移的能力，可响应血管生成信号。内皮细胞在特定基质胶上受生长因子（如VEGF）刺激后，通过迁移、增殖和连接形成管状网络结构，这一过程可直观反映血管生成的动态变化，常用于药物筛选、肿瘤研究和信号通路研究。

二、实验流程

1、基质胶铺板：Matrigel基质胶（浓度≥10 mg/mL，提前4℃过夜解冻）按1:1比例与预冷培养基混合，垂直滴加到预冷96孔板，每孔50μL，4℃静置10分钟使胶均匀分布，37℃孵育30分钟固化。

2、细胞接种：选用低传代（2-8代)内皮细胞如HUVEC，无血清饥饿处理16-24h，消化后重悬至2×105cells/mL，每孔加50ul细胞悬液(约10⁵个细胞），并加入含VEGF（5-10ng/mL）的培养基至满孔。

3、培养与观察：37℃、5% CO2培养箱静置培养培养，HUVEC在4–12小时成管（原代细胞延至18小时），按照细胞生长速度定时观察拍照、留存图像。可在6小时、12小时、24小时分别采集图像。也可在荧光染色后对其进行荧光观察。

三、注意事项

1、不同细胞类型需调整密度，建议预实验确定最佳条件。

2、与基质胶接触的所有培养器皿、耗材和培养液都要预冷，基质胶孵育前始终置于冰上。

3、枪头垂直加样，轻柔混匀避免出现气泡，如有气泡形成可4℃离心（300×g, 10min）去除气泡。

4、铺胶后冰上4℃静置10分钟再孵育，确保胶均匀平整。

5、超过24小时管状结构退化，需在峰值时间用4%多聚甲醛固定。

四、联系咨询

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