一、实验简介

细胞侵袭实验是一种体外模拟细胞穿透基底膜（如细胞外基质ECM）进入周围组织或血管系统的技术，主要用于研究肿瘤转移、炎症反应及伤口修复等过程中细胞的侵袭能力。该实验通过量化细胞穿过人工基底膜（如Matrigel）的数量，评估细胞在趋化因子诱导下的主动迁移和基质降解能力。

二、实验流程

1、基质胶铺板：在冰上用无血清培养基稀释Matrigel基质胶（提前4℃过夜解冻）至1mg/mL，取60μl稀释后的Matrigel基质胶垂直加入Transwell上室，均匀铺平避免气泡。37℃孵育1–3h固化，吸除未结合胶体，加入100μL无血清培养基37℃水化30min。（注意所有与基质胶接触的枪头、EP管和transwell孔板等耗材提前4℃预冷30min）

2、细胞接种：胰酶消化细胞（提前12-24h饥饿处理），无血清培养基重悬，调整密度（通常1–5×10⁵个/孔，需预实验优化）。上室加入200μL细胞悬液，下室加入600–800μL含10%-20%FBS的完全培养基（避免产生气泡），37℃、5%CO₂培养箱中孵育24–48小时（时间依细胞侵袭能力而定）。

3、固定与染色：PBS清洗，棉签轻柔擦除上室未侵袭细胞。4%多聚甲醛固定30分钟，0.1%结晶紫染色10–15分钟，PBS漂洗。

4、观察记录：显微镜下随机选取5–10个视野拍照，计数下室膜表面的细胞，取平均值比较组间差异。

三、注意事项

1、基质胶全程冰上使用，避免室温凝固；分装冻存减少反复冻融。铺胶需均匀无气泡，厚度影响侵袭效率（常用1mg/mL浓度）。

2、小室放入下室时避免气泡阻隔趋化作用，若有气泡需重新放置。

3、细胞密度过高易假阳性，过低则统计意义不足；需预实验优化接种量及孵育时间。

4、擦除未侵袭细胞时棉签擦拭力度需轻柔，避免损伤已穿膜细胞。

5、必设空白对照（无细胞）及迁移对照（无基质胶的Transwell实验）。

6、若细胞侵袭能力弱，可延长饥饿时间或增加下室血清浓度。

四、联系咨询

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