一、实验简介

细胞迁移（cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的定向移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。这种基本的细胞行为在胚胎发育、伤口愈合、免疫应答等生理过程中至关重要，同时也是肿瘤转移等病理过程的核心环节。

细胞迁移实验是研究细胞在体外条件下移动能力的重要方法，通过模拟体内环境可以量化评估细胞的运动能力，探究影响迁移的各类因素及其作用机制。目前最常用的两种细胞迁移实验是划痕实验和Transwell迁移实验。划痕实验通过在单层贴壁细胞上制造一个空白区域（划痕），观察细胞迁移覆盖该区域的能力，更适合于快速筛选和研究贴壁细胞在二维平面上的集体迁移。而Transwell迁移实验则利用聚碳酸酯膜将培养体系分隔为上室和下室，通过研究细胞在趋化因子梯度诱导下穿过微孔膜的能力，更适合于研究化学趋化作用和精确定量细胞的迁移能力。

二、实验流程

（一）细胞划痕实验

1、在培养皿中接种对数生长期细胞并培养至80-90%汇合度。

2、在细胞单层形成后，用无菌枪头或其他划痕工具垂直于培养皿底面划出一条直线划痕，PBS轻轻清洗去除脱落细胞。

3、更换无血清或低血清（≤2%）的培养基，可以根据实验需要添加药物、细胞因子等。

4、在划痕后立即（0小时）于倒置显微镜下拍摄划痕区域的图像，作为起始对照。根据细胞迁移速度，在6、12、24小时等特定时间点，于相同位置再次拍摄图像。

5、使用ImageJ等图像分析软件测量不同时间点划痕的宽度或面积，计算细胞迁移率或划痕愈合百分比。常用的分析方法包括测量划痕宽度差值、计算愈合面积百分比等。

（二）Transwell迁移实验

1、将Transwell小室放入24孔板中。下室加入500-600μL含趋化因子（如10%-20% FBS、特定生长因子或趋化因子）的完全培养基。上室加入100-200μL无血清培养基，静置平衡。

2、消化收集处于对数生长期的细胞，用无血清培养基重悬并计数，调整细胞密度（通常为1-5×10⁵个/mL）。取100-200μL细胞悬液小心加入上室，避免产生气泡。

3、将培养板于37℃、5% CO₂培养箱中孵育12-48小时（具体时间依细胞迁移能力而定）。

4、孵育结束后，取出小室，用PBS轻轻清洗上室表面，用湿棉签小心擦去上室未迁移的细胞。用4%多聚甲醛固定迁移至膜下表面的细胞15-30分钟，0.1%结晶紫染色或者DAPI染核用于荧光计数。

5、在倒置显微镜下随机选择多个视野观察并拍摄图像，计数迁移的细胞，计算平均细胞数，进行统计分析。迁移细胞数越多，表明细胞迁移能力越强。

四、联系咨询

攸碧艾欢迎您来电咨询实验服务，联系电话：400-681-8582。