一、实验简介

耐药细胞株构建一般采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对特定药物产生耐药性，从而建立相应的药物耐药细胞株，旨在模拟肿瘤细胞在化疗压力下逐渐获得生存优势的过程。

二、实验流程

1、测定初始IC50：选择生长状态良好、无支原体污染且处于对数生长期的肿瘤细胞作为亲本细胞，使用MTT法或CCK-8法测定目标药物对亲本细胞的半数抑制浓度（IC50）。

2、药物诱导处理：采用药物浓度递增联合大剂量间歇冲击法诱导处理细胞，在诱导过程中定期取样，用MTT/CCK-8法检测当前细胞群的IC50，计算耐药指数（Resistance Index, RI），RI=耐药细胞IC50/ 亲本细胞IC50，RI>5时通常表明耐药细胞系构建成功。

3、稳定传代与保种：当细胞能在特定高浓度药物下稳定生长且RI值符合要求时，可尝试在不含药物的培养基中传代3代以上。如果其耐药性没有显著降低，表明获得了稳定的耐药细胞系，可以进行大量扩增和冻存保种。

4、 耐药验证：通过Western Blot、罗丹明123外排实验、qPCR/转录组测序对构建好的细胞系进行功能性验证。

三、注意事项

1、客户需要提供生长状况良好的宿主细胞株，以及细胞特性、培养条件和相关注意事项。

2、客户提供相关诱导剂。

四、结果交付

1、提交实验报告书（耐药指数、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）。

2、耐药细胞株、亲本细胞株。

五、联系咨询

攸碧艾欢迎您来电咨询实验服务，联系电话：400-681-8582。