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EXPERIMENTAL SERVICE

染色质共沉淀CHIP实验

分类:分子实验   发布时间    阅读: 223
技术简介:
核酸和蛋白质是组成生命的主要生物大分子,两者的相互作用是构成生命活动的生长、繁殖、运动、遗传和代谢等生命活动的基础。研究蛋白质和核酸间的相互作用是人们探索生命现象奥秘的关键,CHIP检测实验是应用于蛋白与核酸互作关系的重要参考。CHIP实验在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。将ChIP与第二代测序技术相结合的ChIP-Seq技术,能够高效地在全基因组范围内检测与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段,研究体内转录因子和靶基因启动子区域直接相互作用的方法,对于调控蛋白在基因组上的结合靶点筛选、差异化表观遗传变异的原理揭示提供了重要的解决思路。
实验步骤:
Step1:细胞培养物交联和样品制备。
Step2:胞核制备和染色质消化。
Step3:染色质消化和浓度分析。
Step4:染色质免疫沉淀法。
Step5:将染色质从抗体/Protein G Magnetic Beads上洗脱下来并解交联。
Step6:使用离心柱纯化 DNA。
Step7:用PCR定量 DNA。

结果展示:

送样要求:
目的基因或转录因子的相关背景资料。
动物:细胞系、低脂肪含量组织液氮速冻样本(细胞数大于5×106个)。
抗体:进口IP级别抗体/非商业化标准抗体(需检测)。
样品运输:干冰运输,建议用灭菌的样品袋或LoBind 管,parafilm将管口密封好。
实验周期:2周
联系方式:400-681-8582