一、实验简介

染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的关键技术。该技术在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，通过超声或酶处理将其随机切断为200-1000bp的染色质小片段，然后利用抗原抗体特异性结合的原理沉淀复合体，从而富集目的蛋白结合的DNA片段。通过对这些片段的纯化与检测，研究人员能够获得蛋白质与DNA相互作用的精确信息。

ChIP技术的独特优势在于其能够真实反映生理状态下DNA与蛋白质的结合情况，这是体外实验方法无法比拟的。目前该技术主要应用于两个研究方向：一是研究转录因子与特定基因启动子区域的动态结合；二是分析组蛋白各种共价修饰（如甲基化、乙酰化等）与基因表达调控的关系。

二、实验流程

1、细胞培养物交联和样品制备

交联的目的是固定细胞内蛋白质与DNA的相互作用。常使用1%甲醛终浓度处理细胞，室温摇床孵育10分钟。对于组织样本，一般切成1-3mm³大小，交联时间延长至15分钟。交联结束后，加入终浓度为0.125M的甘氨酸终止反应。

2、胞核制备和染色质消化

细胞裂解后，通过超声或酶处理将染色质断裂为200-1000bp的片段。

3. 染色质消化和浓度分析

超声处理后，取部分样本通过琼脂糖凝胶电泳分析片段大小，确保DNA片段长度在200-1000bp范围内（理想范围为150-300bp）。同时测量DNA浓度，每个IP反应通常使用5-15μg染色质。

4. 染色质免疫沉淀法

使用特异性抗体富集目标蛋白-DNA复合物。先取部分染色质作为Input对照，其余与抗体共同孵育4小时或过夜。

5、洗脱和解交联

使用低盐、高盐、LiCl和TE缓冲液依次洗涤复合物，去除非特异性结合。然后加入ChIP洗脱缓冲液，62℃孵育2小时解交联，95℃加热10分钟使蛋白变性。

6、使用离心柱纯化DNA

采用酚氯仿抽提法或者攸碧艾DNA纯化回收试剂盒纯化DNA片段。纯化前需使用RNase A处理样品去除RNA，以免影响DNA纯化量和后续分析。

7、用PCR定量DNA

通过qPCR对纯化的DNA产物进行定量分析。

三、注意事项

1、客户需要提供目的基因或转录因子的相关背景资料，提供动物细胞系、低脂肪含量组织的液氮速冻样本（细胞数＞5×10⁶个），提供经过验证的抗体。

2、样品需干冰运输，封口膜密封。

四、联系咨询

攸碧艾欢迎您来电咨询实验服务，联系电话：400-681-8582。