一、实验简介

Real-Time PCR技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。

二、实验内容

1、相对定量PCR。

2、绝对定量PCR。

三、样本处理及保存运输

1、样品处理

（1）动物组织：常规组织100mg，脂肪组织，结缔组织，纤维化组织适当增加。将组织剪切成合适大小后（建议组织块长宽高≤0.5cm），迅速完全浸泡于5-10倍体积的RNAlater组织样品保存液中。

（2）植物组织：新鲜的叶、果肉、种子至少100mg。将嫩叶、嫩茎组织切成合适的大小（建议长宽高均≤0.5cm）后，迅速完全浸泡于5-10倍体积的RNAlater组织样品保存液中。（注意：某些植物组织天生具有的屏障（如叶子表面的蜡层）可阻碍RNAlater组织样品保存液渗透，通常需破坏这些屏障层以允许溶液浸透。）

（3）细胞等样本：收集≥10⁶个细胞的沉淀（PBS清洗1-2次），迅速加入5-10倍体积的RNAlater组织样品保存液。

（4）酵母、细菌等样本：离心弃上清，收集米粒大小的单菌体沉淀，迅速加入适量的RNAlater组织样品保存液完全浸没菌体沉淀。

（5）全血：至少1mL新鲜血液，EDTA抗凝管收集，-20℃运输。

（6）血清：至少1mL，干冰运输。

（7）RNA样品：OD260/280为1.8-2.0，浓度≥100ng/μL，体积≥20μl，干冰运输。

（8）cDNA：cDNA原液≥20μl，干冰运输。

2、样品保存

加入RNAlater组织样品保存液的样本可在37℃保存1天，之后部分组织中的RNA会开始降解。大部分样品室温（25℃）可稳定保存1周，4℃可稳定保存1个月，不会有明显的RNA降解发生。如需长期存放，可先将保存在RNAlater组织样品保存液中的样本4℃浸透过夜，然后弃去RNAlater组织样品保存液，再将样本放入-20℃或-80℃长期保存。

三、联系咨询

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