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Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒

货号:U22-003A
产品规格: 10*5ml
检测物种:
应用范围: 细胞培养
产品类型: 细胞转染/增殖试剂
保存温度: 2-8℃
产地: YOBIBIO
价格:2680 元

CCK-8细胞增殖检测试剂说明书


概述: CCK-8(Cell Count Kit-8)是一种利用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)快速检测细胞增殖或毒性试验的方法。WST-8是一种类似MTT的四唑盐,在电子载体的存在下,被活细胞内的脱氢酶还原生成水溶性的橙黄色Formazan(甲臜),通过比色法检测甲臜生成量可以反映试验中活细胞的数量。


操作方法:
细胞毒性检测
1. 接种细胞:接种对数期的细胞至96孔板,接种数量1~5×103个/孔,每孔100 μl,每组设置3~5个复孔,置于37℃,5% CO2培养箱;
2. 样品处理:待细胞贴壁后,加入不同浓度的样品处理细胞,然后置于培养箱中孵育一定的时间(如:24 h、48 h、72 h);
3. CCK-8孵育:每孔加入10 μl的CCK-8试剂,轻轻混匀,并将培养板置于37℃,5% CO2培养箱中孵育1~4 h;(可进行预实验确定孵育时间);
4. 上机检测:将孵育后的细胞培养板置于酶标仪上,在450 nm处检测其吸光值;
储存条件: 4℃保存,半年有效;-20℃保存,两年有效
2. 以Hela细胞为例,细胞按1.25×103 ~ 20×103个/孔的密度梯度接种至96孔板中,培养4 h后,待细胞完全贴壁,每孔加入10 μl的CCK-8试剂,轻轻混匀,置于培养箱中孵育1 h后,在450 nm处检测其吸光值,并制作标准曲线。
注意事项:
1. 使用前先将低温保存的试剂在室温条件下放置20-30 min。
2. 接种对数期生长的细胞,注意使细胞分散均匀,确保每个复孔中的细胞数量一致,减少误差。
3. 为了达到最佳的实验效果,建议先进行预实验,确定最佳的细胞接种密度及CCK-8试剂孵育时间;以贴壁细胞为例,接种密度约1~5×103个/孔;孵育时间为1~4 h,多数细胞孵育约30 min即可观察到明显的颜色变化。
4. 设置空白对照,在无细胞的培养基中加入CCK-8检测,去除本底对吸光值的干扰。
5. 如果OD值太高,建议降低细胞接种密度或减少CCK-8试剂孵育时间。
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