small RNA测序
small RNA是生命活动重要的调控因子，在基因表达调控、生物个体发育、代谢及疾病的发生等生理过程中起着重要的作用,包括miRNA、piRNA和siRNA，公司可以提供各类small RNA的测序服务。
A. miRNA: 是一种长度为21～25nt的单链小分子RNA。它广泛存在于真核生物中，成熟的miRNA是由具发夹结构单链RNA前体（pre miRNA）经过Dicer酶加工而成，主要通过与靶标基因不完全互补结合来调控靶基因的表达。miRNA在细胞发育、生物标志物、肿瘤等多个领域中有广泛的应用。
B. piRNA: 是一类长度为26～31nt单链的小RNA，大部分集中在29～30nt。piRNA的表达具有组织特异性，只存在于具有全能性的动物细胞，如生殖细胞、肿瘤细胞和干细胞等。piRNA通过与Piwi亚家族蛋白结合形成piRNA复合物（piRC）来发挥生物学功能（沉默转录基因过程，维持生殖系和干细胞功能，调节翻译和mRNA的稳定性）。此外，piRNA在一些癌症细胞中存在异常表达的现象，提示piRNA可能参与癌症的发生，并可作为癌症诊断和治疗中的潜在生物标记物。
C. siRNA： 内源性干扰小RNA（siRNA, Small interfering RNA），包括ta-siRNA、ra-siRNA和nat-siRNA。ta-siRNA：天然反义转录小干扰RNA，由TAS基因编码，miRNA剪切产生，21nt，作用机制类似于miRNA；ra-siRNA：由重复序列、转座子、异染色质产生，多为24nt；nat-siRNA：由天然反义转录本（序列与同区域互补链上基因的mRNA方向相反且发生部分重叠）产生。siRNA的功能主要与植物胁迫和生物发育相关。
技术优势：
（1）完整性好：一次实验可以同时检测多种small RNA,信息来源于数据库同步；
（2）可靠性强：高数据量保证不同丰度small RNA都能准确定量；
（3）前瞻性好：能发现未知的small RNA信息，适合所有物种的研究。
技术线路：
样本准备：
（1）样品类型：细胞、新鲜组织或RNA样品。
（2）样品量：细胞样品请提供至少1×107个细胞，组织样品请提供至少300mg的组织块或切片，RNA样品请提供2 μg以上的总RNA。
（3）样品质量：RNA无明显降解，提取的总RNA OD260/280值在1.8~2.2之间，浓度≥ 500 ng/μl，28S:18S ≥ 1.5，RIN ≥ 7。
（4）样品保存：细胞样品或新鲜组织块（切成~50mg的小块）可用TRIZOL或RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融。
（5）样品运输：样品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰运输。
数据分析：
应用案例：
研究背景：
为了更好理解调控RNA的进化，通过深度测序检测线虫和三个近缘物种(C.briggsae，C.remanei，和C.brenneri) 的小分子RNA ( miRNA,siRNA,piRNA)。结果表明小RNA途径整体并非一成不变, 本质上没有保守的特定序列。除了一小部分miRNA保守外,多数miRNA是种属特异性的. 尽管piRNA和siRNA并没有保守的特征序列，但是在各自途径的许多特性却是保守的。最后，我们发现性别特异性的piRNA在所有四个品种中保守，这表明piRNA在不同生殖系统中扮演不同的角色。
研究方法：
分析结果:
1. 不同物种间检测到的miRNA。
2. 不同性别个体中piRNA的表达差异。
